ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。通常可適用于測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清、血漿以及組織裂解物樣品等。
指南各種制備方法適用于常規(guī)ELISA，樣品的制備方法通常也會(huì)隨測(cè)定靶標(biāo)和檢測(cè)方法而適當(dāng)變化，在建立新的檢測(cè)方法時(shí)，建議查閱相關(guān)文獻(xiàn)或進(jìn)行必要的流程優(yōu)化。
在收集樣品前有必要建立完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定，我們提倡新鮮樣品盡早檢測(cè)，對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆谩?/span>如有特殊原因需要周期性收集樣品，在造模取材后，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰箱與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。
【細(xì)胞培養(yǎng)上清】
將細(xì)胞培養(yǎng)基移至離心管，并在4℃條件下以1,500 rpm離心
10min。立即等分上清液并于-80℃下保存樣品。盡可能減少樣品凍融。
【血清】
室溫血液自然凝固10~20min后，4℃條件下以3,000 rpm離心10min。立即等分上清液并于-80℃下保存樣品。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。避免反復(fù)凍融樣品。
【血漿】
將全血收集到含抗凝血?jiǎng)┑墓苤校鶕?jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，在4℃條件下以3,000 rpm離心10分鐘。立即等分上清液(血漿)并于-80℃下保存樣品，避免反復(fù)凍融樣品。
【唾液】
收集樣品并在4℃下以10,000 x g離心2分鐘。
立即等分上清液并在-80℃下保存樣品，避免反復(fù)凍融樣品。
【尿液】
用無(wú)菌管收集，并在 4℃下以10,000 x g離心2分鐘。
立即等分上清液并于-80℃下保存樣品。避免反復(fù)凍融樣品。
采集組織(最好在冰上操作，并應(yīng)盡可能快以防止被蛋白酶降解
)樣品后，稱取組織凈重，用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩悠繁４嬖? 80℃下以便后續(xù)使用或放置在冰上進(jìn)行直接勻漿。加入一定量的組織提取緩沖液，用手工或勻漿器將樣品勻漿充分。
在4℃下以13000 rpm離心20分鐘。置于冰上，將上清液(可溶的蛋白質(zhì)提取物)等分至新的冷卻管中并在-80℃下保存樣品。避免反復(fù)凍融樣品。
ELISA常見問題解答
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