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本文主要針對以下幾個(gè)常見的亞細(xì)胞架構(gòu)：細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞骨架，為大家介紹如何選擇合適的試劑/探針分別對它們進(jìn)行染色。

利用熒光染料對細(xì)胞膜進(jìn)行標(biāo)記和示蹤的成像技術(shù)是研究細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的重要手段。

DiD、DiO、DiI、DiR和DiS染料是最常見的細(xì)胞膜染料，它們是一族親脂性的熒光染料，專門用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。該系列染料進(jìn)入細(xì)胞膜后，會(huì)在整個(gè)細(xì)胞膜上側(cè)向擴(kuò)散，在最佳濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。它們與細(xì)胞膜結(jié)合后熒光強(qiáng)度會(huì)大大增強(qiáng)，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命，高熒光強(qiáng)度至少維持在30天，甚至長達(dá)2年以上。

DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和DiR（深紅色熒光）的獨(dú)特?zé)晒忸伾珵榛罴?xì)胞的多色成像和流式細(xì)胞分析提供了便利的工具。

DiO和DiI可分別與標(biāo)準(zhǔn)FITC和TRITC過濾器一起使用。

DIO染料聚合物在3D腫瘤球體中的標(biāo)記

DiI染料標(biāo)記雞胚胎神經(jīng)嵴細(xì)胞

DiD被633 nm He-Ne激光器激發(fā)，并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射波長，為標(biāo)記具有顯著內(nèi)在熒光的細(xì)胞和組織提供了有價(jià)值的替代方案。DID染料的染色效率高，均一，不易猝滅，無明顯細(xì)胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DID已成功應(yīng)用于多種細(xì)胞的體內(nèi)示蹤研究，如Treg細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、造血干細(xì)胞等。

DID染色效率的激光共聚焦掃描成像圖

DiR發(fā)出的紅外光可以通過細(xì)胞和組織的有效傳輸以及紅外范圍內(nèi)的低水平自發(fā)熒光，可用于體內(nèi)成像或示蹤。

細(xì)胞質(zhì)是細(xì)胞質(zhì)膜以內(nèi)、細(xì)胞核以外的部分。細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)是指細(xì)胞質(zhì)去除細(xì)胞器之外的部分，呈現(xiàn)膠質(zhì)狀態(tài)。是正常細(xì)胞進(jìn)行生命活動(dòng)的主要場所，正常狀態(tài)下為透明的膠狀物，內(nèi)含細(xì)胞新陳代謝所需的多種營養(yǎng)物質(zhì)，由水、無機(jī)鹽、脂質(zhì)、糖類、氨基酸、核苷酸和多種酶組成。

Calcein AM/6-CDCFDA 都是一種可對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑。

原理相似：Calcein AM/6-CDCFDA能夠輕易穿透活細(xì)胞膜，進(jìn)入到細(xì)胞質(zhì)后，酯酶會(huì)將其水解留在細(xì)胞內(nèi)，發(fā)出強(qiáng)熒光。因?yàn)槠浼?xì)胞毒性低，是最適合作為活細(xì)胞的熒光探針。

而Lucifer Yellow Cadaverine 通常作為可固定的熒光示蹤劑。Lucifer Yellow Cadaverine 可以標(biāo)記細(xì)胞中的內(nèi)吞噬泡。由于其水溶解度高、熒光明亮、細(xì)胞毒性低，并且具有較寬的Stokes shift，我們可以在固定和活細(xì)胞中觀察內(nèi)吞噬泡。此外，它還可以用于結(jié)合羧酸基團(tuán)。

細(xì)胞骨架指真核細(xì)胞質(zhì)中與保持細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)有關(guān)的蛋白質(zhì)纖維網(wǎng)架體系(包括微管、微絲、中間絲)。主要參與維持細(xì)胞形狀、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸、染色體分離和細(xì)胞分裂等重要生命活動(dòng)。

微絲呈細(xì)絲狀，在細(xì)胞中成束排列，其主要成分是肌動(dòng)蛋白，絲狀肌動(dòng)蛋白（F-actin）是肌動(dòng)蛋白多聚體，由肌動(dòng)蛋白單體（G-actin）形成。

微絲在細(xì)胞生命活動(dòng)中有許多重要功能。

鬼筆環(huán)肽是從致命的鵝膏菌（Amanita phalloides）蘑菇中分離的毒素，是一種雙環(huán)肽，能與F-actin特異性結(jié)合。當(dāng)用熒光染料標(biāo)記時(shí)，可以顯示微絲骨架在細(xì)胞中的分布，它是研究F-肌動(dòng)蛋白分布的非常方便的工具。熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽在納克水平就可與F-actin選擇性的結(jié)合并且易溶于水，為檢測組織切片，培養(yǎng)細(xì)胞和無細(xì)胞體系中的actin的定位和定量提供了非常方便的標(biāo)記方法。

產(chǎn)品特點(diǎn) ： 

多種顏色可選擇，熒光亮度高，光穩(wěn)定性好，適合做顯微鏡檢測。
親和力高：平均每個(gè) F - actin 亞基結(jié)合一個(gè)鬼筆環(huán)肽分子。

特異性強(qiáng)：特異性結(jié)合于 F - actin，而不與 G - actin 結(jié)合。

優(yōu)于抗體染色：與 F - actin 的結(jié)合親和力在不同物種間無顯著變化。

靈敏度高：納摩爾濃度 (nM) 染色即可滿足實(shí)驗(yàn)要求。

適用范圍廣：無物種差異性，也適用于甲醛固定和打孔處理后的組織樣本。