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百瑞極——常見(jiàn)細(xì)胞器染色(5)

膜電位檢測(cè)


膜電位通常是指以膜相隔的兩種溶液之間產(chǎn)生的電位差,一般情況下是指細(xì)胞生命活動(dòng)過(guò)程中伴隨的電現(xiàn)象,是存在于細(xì)胞膜另外兩側(cè)的電位差。一般膜電位分為靜息狀態(tài)和興奮狀態(tài)兩種。靜息狀態(tài)時(shí),主要是由于細(xì)胞膜內(nèi)的鉀離子擴(kuò)散到膜外從而形成內(nèi)負(fù)外正的靜息電位。興奮狀態(tài)時(shí),細(xì)胞膜對(duì)鈉離子的通透性加強(qiáng),是膜外的鈉離子向膜內(nèi)擴(kuò)散,從而形成內(nèi)正外負(fù)的動(dòng)作電位。


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 檢測(cè)膜電位染料


TMRM(四甲基羅丹明甲酯)/TMRE (四甲基羅丹明乙酯)是一種陽(yáng)離子細(xì)胞滲透型熒光染料,易與活躍的線粒體螯合,是可用能斯特方程定量測(cè)量膜電位的優(yōu)選染料。染料不會(huì)在細(xì)胞膜中形成聚集體,并且與膜蛋白具有最小的相互作用。因此,根據(jù)能斯特方程,染料的跨膜分布與膜電位直接相關(guān)。


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Di-4-ANEPPDHQ 是一種能夠快速反應(yīng)膜電位變化的染料。本身不具備熒光活性,只有和細(xì)胞膜結(jié)合后才會(huì)發(fā)出熒光。它可以足夠快地檢測(cè)瞬態(tài)(毫秒)可興奮細(xì)胞的膜電位變化。在各種組織、細(xì)胞、以及細(xì)胞膜模型中,Di-4-ANEPPDHQ 的熒光變化幅度較為均一,每 100 mV 的變化通常顯示 10 %的熒光改變。


Di-8-ANEPES 屬于 ANEP 染料家族,它們的光學(xué)反應(yīng)能夠快速檢測(cè)細(xì)胞中瞬時(shí)跨膜電位的改變,可以證明膜電勢(shì)依賴激發(fā)光譜的轉(zhuǎn)換。這種特性可以通過(guò)激發(fā)率的改變檢測(cè)膜電勢(shì)的改變。ANEP 染料在水溶液環(huán)境中具有微弱的熒光,在脂質(zhì)環(huán)境中可以轉(zhuǎn)變?yōu)閺?qiáng)烈的熒光(例如細(xì)胞膜)。快速反應(yīng)探針的操作通過(guò)改變電子結(jié)構(gòu)從而產(chǎn)生它們的熒光屬性以適應(yīng)周圍電場(chǎng)的改變。它們的光學(xué)反應(yīng)能夠快速檢測(cè)可興奮細(xì)胞,例如單神經(jīng)元、心肌細(xì)胞和完整大腦中毫秒跨膜電位的改變。


由于它的磺化基團(tuán),Di-8-ANEPPS 比其他 ANEPP 染料更少受細(xì)胞內(nèi)化的影響,且具有更強(qiáng)的親脂性,因此更適合于長(zhǎng)期膜電位研究。此外,Di-8-ANEPPS 比 Di-4-ANEPPS 具有更高的光穩(wěn)定性和更低的光敏性。


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苯乙烯基染料 RH237 是一種快速反應(yīng)電位探針,主要用于神經(jīng)元的功能成像,還用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞膜電位,突觸活動(dòng)和神經(jīng)元離子通道活性。苯乙烯基染料通常的吸收或激發(fā)光譜藍(lán)移為 20 nm,發(fā)射光譜藍(lán)移為 80 nm。


RH421 是一種快速響應(yīng)的膜電位染料,廣泛地用于神經(jīng)元跨膜電位、突觸活動(dòng)和離子通道活動(dòng)的檢測(cè)。在神經(jīng)母細(xì)胞瘤模型中,對(duì)于每 100 mV 電壓的變化,它展示出了大于 20%的熒光改變。


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DiBAC4(3) 是一種慢響應(yīng)膜電位探針,它進(jìn)入到去極化的細(xì)胞,和細(xì)胞內(nèi)的蛋白或膜結(jié)合,發(fā)出很強(qiáng)的熒光。細(xì)胞去極化導(dǎo)致染料內(nèi)流,熒光增強(qiáng);相反,細(xì)胞超極化則熒光減弱。


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DiOC2(3) (碘化物)是一種廣泛應(yīng)用的膜電位探針。如用于線粒體膜電位的研究,DiOC2(3)能夠穿透真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì),在濃度低于 100 nM 時(shí),染料在具有活躍膜電位的線粒體中積累,形成紅色熒光聚集體,當(dāng)使用破壞線粒體膜電位的(如 CCCP)處理細(xì)胞時(shí),DiOC2(3)染色強(qiáng)度降低。DiOC2(3)染色的細(xì)胞可以通過(guò)流式細(xì)胞儀的藍(lán)色激發(fā),綠色和紅色發(fā)射可視化。該試劑可與其他試劑搭配使用,例如紅色激發(fā)的 Annexin V–APC,用于活力和凋亡的研究。


碳菁染料 DiOC5(3) 被廣泛用于膜電位的測(cè)量。


DiOC6(3) 是一種細(xì)胞滲透性綠色熒光親脂染料,也是一種被廣泛應(yīng)用的膜電位染料。在低濃度時(shí),DiOC6(3) 對(duì)活細(xì)胞內(nèi)的線粒體染色具有選擇性;在高濃度時(shí),該染料可以在活細(xì)胞或固定的細(xì)胞中染色其他細(xì)胞器內(nèi)膜,如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等。此外,DiOC6(3) 也被用來(lái)研究神經(jīng)元或酵母中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)的相互作用和動(dòng)力學(xué)。


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